Fagocitosis por macrófagos murinos de levaduras de Histoplasma capsulatum opsonizadas con diferentes subclases de igG

Resumen

Se estudi6 la cin~tica de internalizaci6n de levaduras
opsonizadas con diferentes subclases de IgG obtenidas de ratones
infectados, asi como la participaci6n de distintos receptores Fer
(FcrR). Las celulas levaduriformes fueron incubadas 30 min a 37°C
con fracciones enriquecidas por cromatograf1a en Sepharoseprote1na
A de IgG1 , IgG2 , o IgG2b con actividad antiHistoplasma.
Se utiliz6 Ig~ de ratones no infectados como
testigo. Antes de permitir la internalizaci6n a 37°C, las
levaduras opsonizadas fueron lavadas y ajustadas a una relaci6n
5:1 con respecto a las celulas fagociticas. se emp.learon
monocapas de una linea celular de macr6fagos murinos, la J774.2,
y se permiti6 la adherencia de levaduras por 1 h a 4°C, sabre las
monocapas cultivadas, para uniformar y sincronizar la ingesti6n
del in6culo. La participaci6n de las IgG y del FcrR fue
determinada por una modificaci6n de la t~cnica de ELISA,
utilizando una IgM de cabra anti-IgG de rat6n conjugada a
peroxidasa, para evidenciar levaduras opsonizadas con IgG en la
superficie de los macr6fagos a diferentes tiempos de fagocitosis.
Los resultados mostraron una baja en las lecturas de densidad
6ptica, reveladas por ELISA, a los 15-60 min de fagocitosis,
recuperandose estas en 'los tiempos posteriores, lo que sugiere la
desaparici6n de los FcrR en este periodo debido a su utilizaci6n
o cointernalizaci6n por las levaduras opsonizadas , asi como su
posible reciclaje. Respecto a las diferentes subclases de IgG
empleadas, los resultados permitieron caracterizar una mayor
actividad opsonizante para las IgG1 e IgG4a y una probable
participaci6n del receptor FerRI! en la 1nternalizaci6n de
levaduras opsonizadas.