El sistema Cre/loxP como una herramienta genética en Yarrowia lipolytica

Resumen

La levadura no convencional Yarrowia lipolytica ha sido estudiada ampliamente,
su genoma está totalmente secuenciado y existen numerosas herramientas moleculares para
su estudio; sin embargo, los marcadores genéticos son limitados. Por tanto, surge la
necesidad de reciclar dichos marcadores. Dada la ventaja de que Y. lipolytica expresa
diferentes fuentes de proteína recombinante se construyó un plásmido de expresión para la
recombinasa Cre1 a partir de un plásmido replicativo bajo la dirección de un promotor
fuerte. La actividad de la recombinasa se evaluó en mutantes obtenidas por transposición. El
plásmido mTnYl1 contiene en sus extremos dos secuencias Lox que son blanco de la
recombinasa del fago P1. Los resultados indicaron una alta eficiencia de actividad y
especificidad de la recombinasa. Bajo esta estrategia, se hizo el recambio del gen marcador
de selección URA3 contenido en mTnYl1 y se secuenció el segmento generado después de la
acción de la recombinasa para corroborar su adecuada acción. Esta estrategia es simple pero
es una poderosa herramienta de biología molecular para realizar manipulaciones múltiples
en ingeniería genética para el estudio de Y. lipolytica bajo la selección y utilización de un solo
gen marcador.